PLASMİD DNA'NIN ALKALİ LİZAT'TAN İZOLE EDİLMESİNDE İKİ FAZLI SULU SİSTEM İLE İSOPROPANOL ÇÖKTÜRME YÖNTEMİNİN BİRLEŞTİRİLEREK KULLANIMININ İNCELENMESİ


Makale AdıPLASMİD DNA'NIN ALKALİ LİZAT'TAN İZOLE EDİLMESİNDE İKİ FAZLI SULU SİSTEM İLE İSOPROPANOL ÇÖKTÜRME YÖNTEMİNİN BİRLEŞTİRİLEREK KULLANIMININ İNCELENMESİ
YazarlarNeşe Atacı, İnci Arısan
Anahtar kelimelerPlazmid DNA , plazmid izolasyonu , iki fazlı sulu sistemler , gen tedavisi , 2-propanol ile
Makale ÖzetiBu çalışmada plazmid DNA`nın alkali lizat örneğinden polietilen glikol 600 ve amonyum sülfat bileşiminden oluşan iki fazlı sulu sistemde ayrılması ve bu ortamdan plazmid DNA`nın daha saf olarak elde edilmesi için 2- propanol ile çöktürme yönteminin kullanılması incelendi. Seçilen iki fazlı sulu sistemin bileşimi % 35 w/w PEG 600 % 6 w/w amonyum sülfattır. Kullanılan iki fazlı sulu sisteme uygulanan lizat örneği kütlece % 20 dir. Elde edilen sonuçlar %1`lik agarose gel elektroforezinden alınan jel örnekleri ile kalitatif olarak incelendi. PEG 600 (%35 w/w) - (NH4)2SO4 (%6 w/w) bileşiminden oluşan iki fazlı sulu sistemin alt fazından plazmid DNA’nın yanısıra safsızlık olarak RNA gözlemlendi. Plazmid DNA`nın RNA`dan uzaklaştırılarak daha saf olarak elde edilmesi için farklı konsantrasyonlarda 2-propropanol ile çöktürme işlemi yapıldı Sonuç olarak plazmidin veriminin en yüksek olduğu 2-propanol konsantrasyonu 0,7 (v/v) olarak belirlendi. 0,7 (v/v) den daha yüksek 2-propanol konsantrasyonları için plazmid veriminin düştüğü gözlendi.
English Keywords Plasmid DNA , plasmid isolation , aqueous two phase systems , gene therapy , 2-propanol precipitation
Article Summary in English This work presents a study of the partitioning of a plasmid from alkaline lysate in polyethylene glycol (PEG) / ammonium sulfate aqueous two-phase system (ATPS). The aqueous two-phase extraction system was prepared with a 35 % w/w PEG 600, 6 % w/w ammonium sulfate and 20 % w/w of lysate load. The performance of this process was determined by qualitative assays. Qualitative analysis was realized by using 1 % of agarose gel electrophoresis. PEG 600 (35% w/w) - (NH4)2SO4 (6% w/w) system recovered total amount of plasmid with small amount of RNA in bottom phase. In addition, the bottom phase of the system was integrated with 2-propanol precipitation step. Plasmid yield and RNA profile were observed for the use of different 2-propanol concentrations. Finally, maximized plasmid yield was obtained at 0,7 (v/v) 2-propanol concentration. In higher concentrations than 2-propanol of 0,7 (v/v) plasmid yields were decreased, and in this case plasmid was removed together with RNA in supernatant.
Makale Dosyası İndirMakale Tam Metni

Games likegold miner games and game for mobile gamikro games to people around the world.